Fehérje tisztítás |
|
Bővebben az Invitrogen weboldalon Fehérje izolálás
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
Termék |
Tulajdonságok |
Kötési tulajdonságok |
Ligand típusa |
Kötési idő |
|
2.8 µm gyöngy |
human IgG Fc-kötés 250 µg-ig |
Human IgG1, 2, 4 - Mouse IgG2a, 2b, 3 - Rat IgG2c - Bovine IgG2 – Canine IgG - Goat IgG2 - Guinea Pig IgG - Monkey IgG - Porcine IgG - Rabbit IgG – Sheep IgG2 |
>10 min. |
|
|
2.8 µm gyöngy |
Fc-binding 640-ig µg egér IgG |
Human IgG1, 2, 3, 4 – Mouse IgG1, 2a, 2b, 3 - Rat IgG2a, 2c – Bovine IgG1, 2 - Goat IgG1, 2 – Guinea Pig IgG - Horse IgG - Monkey IgG – Porcine IgG - Rabbit IgG - Sheep IgG1, 2 |
10–40 min. |
|
|
2.8 µm gyöngy |
véletlenszerű kötés, de elsősorban Fc |
Mouse IgG1, IgG2a, IgG2b |
> 30 min. |
|
|
2.8 µm gyöngy |
véletlenszerű kötés, de elsősorban Fc |
bármely Rabbit IgG antibody |
> 120 min. |
|
|
2.8 µm hidrofób gyöngyök, kovalensen kötött sztreptavidinnel |
5 - 10 µg biotinilált antitest/mg |
bármely biotinilált antitest |
30 min. szobahőn |
|
|
1 µm hidrofil gyöngyök, kovalensen kötött sztreptavidinnel |
20-25 µg biotinilált antitest/mg |
bármely biotinilált antitest |
30 min.szobahőn |
|
|
1 µm gyöngyök TALON® kémiával |
kb. 10 µg hisztidin tagged protein/mg gyöngy |
Histidine affinity tagged proteinek |
10 min szobahőn |
Minta preparálás
|
Gyanta alapú tisztítás |
|
|
Hisztidin-tag-el ellátott rekombináns fehérjék tisztítása. |
|
|
Hisztidin-tag-el ellátott rekombináns fehérjék tisztítása, a sepharose alapú gyanta kelátkötő-ligandumként iminodiecetsav csoportokat (IDA) tartalmaz |
|
|
Histidine affinity-tagged rekombináns fehérjékhez. |
|
|
Glutathion S-Transzferáz (GST) véggel ellátott fehérjék. |
|
|
Biotinilált fehérjék. |
Streptavidin Agarose Dynabeads® Streptavidin |
|
Humán, egér, nyúl, és tengerimalac IgG izolálására. |
|
|
IgG tisztítás és frakcionálás. |
|
|
Kecske, birka, ló, marha, patkány, egér, humán, nyúl és tengerimalac IgG izolálására. |
|
|
Egér IgG. |
|
|
Nyúl IgG. |
|
|
IgG, IgA, IgE, IgM izolálásához. |
|
|
Egér monoklonális IgG1. |
|
|
Protein A immunoszorbent |
|
|
Sulfhidril csoportokat tartalmazó fehérjék immobilizálására. |
|
|
EKMax és más enterokináz enzimek eltávolítására. |
|
|
Fúziós peptidek hasítása |
|
|
Affinity tag-ek eltávolítása. Hasítási hely: Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly. |
|
|
Fúziós proteinek hasítása a Asp-Asp-Asp-Asp-Lys peptid szekvenciánál. |
|
|
SUMO negyedleges szekvenciát ismeri fel. |
|
|
Protein frakcionálás |
|
|
Reverz fátisú mágneses gyöngy kromatográfia |
|
|
Ioncserélő mágneses gyöngy kromatográfia |
|
Organellum izolálás
A Dynabeas mágneses gyöngyökkel egyszerűen izolálhatunk különféle sejtorganellumokat, mint pl. mitokondrium, peroxiszóma, vese glomerulus.
|
Alkalmazás |
Specifikáció |
Termék |
Előny |
|
EM képek/ SEM képek |
|
extra finom felszín,mely szép EM képalkotást tesz lehetővé az izolált organellumról |
|
|
törékeny organellumok vagy organellum frakciók izolálása |
egér elsődleges antitest használata |
direkt vagy indirekt organellum izolálás, hatékonyabb |
|
|
nyúl elsődleges antitest használata |
direkt vagy indirekt organellum izolálás, hatékonyabb |
||
|
antitestek más fajokból |
hatékony direkt vagy indirekt organellum izolálás |
||
|
nagy organellum frakciók vagy viszkózus mintából való izolálás |
antitestek specifikus fajokból |
Dynabeads® M-450 with a secondary antibody against the corresponding primary Ab species |
könnyebb, hatékonyabb izolálás viszkózus mintákban |
|
organellumok izolálásához nem antitest ligandum alkalmazásával |
amikor a nagy kihozatal fontos |
egyszerű molekulát hozzákötni |
|
|
organellumok izolálásához nem antitest ligandum alkalmazásával |
amikor a nagy tisztaság fontos |
egyszerű molekulát hozzákötni, nagyon tiszta fehérje izolálás |
Immunprecipitáció
Az új generációs DynaMag Spin és DynaMag 2 mágnesek kitűnően alkalmazhatóak proteinek és nukleinsavak Dynabeads alapú szeparálásánál, kis térfogatú minták esetén. Az új mágnesekben egyesül az új design és a nagy erősségű mágnes hatékonysága. Mindkét mágnes esetében a mintatartó állvány kivehető a mágneses alapból, így a minták vortexelése, a mosási lépések egyszerűen kivitelezhetőek.
|
Mágnes |
Mágnes neve / |
Leírás |
|
|
10 µl - 2000 µl Megjegyzés: Ez a mágnes a Dynal MPC-S mágnest cseréli le. |
•16 standard 1.5 ml - 2 ml mikrocentrifuga cső befogadására alkalmas. •Ideális automatizálásra: 8 tartóhely az állvány mindkét oldalán •Minden típusú Dynabeads-el haszálható. |
|
|
10 µl - 2000 µl Megjegyzés: Ez a mágnes a Dynal MPC-S mágnest cseréli le. |
•6 standard 1.5 ml - 2 ml mikrocentrifuga cső befogadására alkalmas. •A kör alakú felső tartó egyszerűen kivehető a mágnes alapból. •Minden típusú Dynabeads-el haszálható. |
Áttörés az immunprecipitációs munkáknál!
A Dynabead mágneses gyöngyökkel konjugált protein A illetve protein G kiválóan alkalmas fehérjék és nagy fehérje komplexek gyors izolálására.
Előnyök:
- Rövid, 40 perces protokoll.
- Automatizálható munkafolyamat.
- A mágneses gyöngyökkel történő fehérje szeparálás során a célfehérjét szinte semmilyen stresszhatás nem éri, intakt fehérjeizolálás.
- Nincs nem-specifikus kötődés, így a magas háttér kiküszöbölhető.
- Az izolálási lépések egy csőben zajlanak le, ezáltal maximális a szenzitivitás és minimálisra csökken a célmolekulák elvesztése.
- Kitűnő kis mennyiségű IgG izolálására és immunprecipitációra.
- Nincs centrifugálás, nincs oszlop és a mintákat nem kell előkezelni.
- A gyöngyökkel konjugált protein A és protein G nem tartalmaz albumin kötőhelyet, így elkerülhető a kontamináló fehérjék izolálása.
|
|
Protein A |
Protein G |
|
Source |
Bacillus |
E.coli |
|
Molecular weight |
32 kDa |
30 kDa |
|
No.of binding sites for IgG |
4 |
2 |
|
Binding capacity* |
250 µg human |
640 µg mouse |
|
Optimal binding pH |
8.2 |
7.0 |
