Western blot

Automatizált teljes Western munkafolyamat
Western blot – fehérje transzfer
Western blot – detektálás

Automatizált teljes Western munkafolyamat

Az INVITROGEN legújabb készüléke a Western blot folyamatát teszi a kutatók számára pontosabbá, gyorsabbá és egyszerűbbé. A készülék a teljes Western munkafolyamatot önállóan elvégzi, ezáltal felszabadul a kutató ideje, ami egy átlagos Western protokoll időtartamát tekintve (6-16 óra) igen jelentős időmegtakarítást jelent. Amíg a készülék elvégzi Ön helyett a fáradságos és hosszadalmas munkafolyamatot, addig Ön másik munkát tud végezni. A készülék másik nagy előnye, hogy az előre programozott folyadékadagolók pontosan kimérik a különféle reagenseket, így a Western blot munkák egyszerűen reprodukálhatóak, a kísérleti eredmények pedig pontosabbak lesznek.

Leírás és jellemzők:

BenchPro™ 4100 Western Processing System két részből áll a BenchPro™ 4100 Card Processing Station-ből és a BenchPro™ 4100 Western Card-ból. BenchPro™ 4100 Card Processing Station: a készülék előre programozott Western protokollokat tartalmaz, azonban a felhasználó is beírhatja és elmentheti a saját Western protokollját. Nem szükséges az egyedi protokollon semmilyen változtatás vagy optimalizálás. A készülék beépített folyadékadagoló pumpákat tartalmaz a reagensek adagolására. BenchPro™ 4100 Western Card: ez az eldobható, egyszer használatos egység végzi a procedúrát a membránon. Használata kiküszöböli a kontaminációt, nem kell mosogatni, különféle edényeket használni. A Card-ot a membránnal együtt helyezzük a készülékbe. A membránhoz -a Card-on keresztül- az automata pumpa rendszer juttatja el a felhasznált reagenseket. Egyszerre 4 db membránon végezhető a készülékkel Western blot.

Miért érdemes váltania?

• A készülék dolgozik Ön helyett – a felszabadult időt más kísérletekre fordíthatja.
• Nincs kontamináció.
• Mindig ugyanolyan reagens mennyiségek alkalmazása – pontos eredmények, reprodukálható kísérletek.
• Akár négy membránon végezhető egy időben Western blot különféle reagensekkel az egyes membránoknál.
• Előre programozott vagy egyedileg betáplált Western protokollokkal dolgozhat.
• Nincs szükség a régi protokollok változtatására vagy optimalizálására.
• A rendszer kompatibilis bármilyen kromogén, kemilumineszcens illetve fluoreszcens detektálási technikával.
• Hidegszobában, 4ºC-on is működtethető.

Manual processing vs. BenchPro™ 4100 processing of western blots.

(A ) Manual processing; (B) BenchPro™ 4100 system processing. Lane: 1 - 8ul of a 1:10 dilution of MagicMark™ XP standard; lane 2 - 50 ng BSA; lane 3 - 25 ng BSA; lane 4 - 10ng BSA. Proteins were detected using  rabbit anti-BSA antibody and WesternBreeze® Chemiluminescent kit - Anti-Rabbit. Detection substrate was added to both membranes, and the blots were imaged at the same time.

A készülékről további információkat kérhet a területi képviselőktől!

Western blot – fehérje transzfer

Száraz blottolás

Az iBlot™ Dry Blotting System, mely két részből az iBlot Dry Blotting Device-ból és az iBlot™ Dry Blotting Gel Transfer Stacks-ből áll, forradalmasítja a Western-blot technikát. Segítségével gyorsan és megbízhatóan kivitelezhető a fehérjék átvitele különböző géltípusokból anélkül, hogy puffereket alkalmaznánk a művelet során.

A módszer előnyei:

-A felhasználóbarát iBlot™ Dry Blotting készüléket belső tápegységgel tervezték, melynek segítségével gyors, megbízható átvitel érhető el, akár hét percen belül.
-Az egyedülálló iBlot™ Gel Transfer Stacks egy integrált nitrocellulóz transzfer membrán segítségével lehetővé teszi a fehérjék száraz elektroblottolását pufferek jelenléte nélkül is. Kompatibilis a NuPage®, Bis-Tris és Tris-Acetate, Tris-Glycine, Tricine és E-PAGE gélekkel.
-Az iBlot™ Dry Blotting készülék előre programozott, 5 program segíti a fehérjék átvitelét különböző géltípusokból.
-A száraz blottolással átvitt fehérjék nagyobb immundetekciós érzékenységet mutatnak, mint azok, amelyeket hagyományos fél-száraz vagy fél-nedves technikákkal vittek át.
-Beépített biztonsági alkalmazások növelik a felhasználók védelmét.

Minden iBlot™ Gel Transfer Stacks tartalmazza a megfelelő anód és katód puffereket egy különleges, az Invitrogen által kifejlesztett gél mátrixba ágyazva, valamint az elektroforézishez szükséges réz elektródákat. Ez a technológia teszi lehetővé a puffermentes száraz blottolást.

Tulajdonságok:
Blottolási terület: 13.5 cm x 7.7 cm (1 midi vagy 2 mini gél)
Géltípus kompatibilitás: agaróz és poliakrilamid
Puffer: nem szükséges
Transzfer idő: 7 perc a sajátöntésű gélek, 2 perc az E-Gel® gélek esetén
Tápegység: nem szükséges

Félszáraz és nedves blottolásról itt talál részleteket

Western blot – detektálás

Az Invitrogen többféle komplett Western blot detektáló kitet ajánl a felhasználóknak. A kitek között megtalálható a két leggyakrabban használt enzim, a tormaperoxidáz (HRP) és az alkáli foszfatáz (AP). A különféle AP illetve a HRP-alapú kitekkel végezhetünk kromogén, kemilumineszcens és fluoreszcens detektálást is.

Western blot detektáló kitek

Az Invitrogen által kifejlesztett WesternDot kitek membránon immobilizált antigének detektálására alkalmasak.

A technológia újdonsága a Qdot nanokristály alkalmazásán alapul, melynek során a detektálás nem radioaktív illetve nem kemilumineszcens alapú, hanem fluoreszcens. További újdonság, hogy a nanokristály alkalmazása miatt nem szükséges különleges fényforrás a gerjesztéshez és a fluoreszcens szignál detektálásához sem. A Qdot 625 nanokristályok a hagyományos UV lámpákkal gerjeszthetőek és a kibocsátott fényt szintén a hagyományos etídium bromid vagy kék emissziós szűrőkkel detektálni lehet.

A WesternDot 625 Western Blot kitek tartalma és működése:

Jelenleg kétféle WesternDot kit formátum létezik, azonban az Invitrogen kínál külön további másodlagos biotinilált antitesteket is és a Qdot 625-streptavidin konjugátum szintén megvásárolható külön kiszerelésben. Mindez lehetővé teszi, hogy a kitek mellett a kutatók akár egyedi igényű összeállításban is használhassák a technológiát.

A membránon immobilizált fehérjéhez először egy elsődleges antitestet kötünk, majd egy biotinnal konjugált másodlagos antitestet. Ehhez kötődik hozzá a streptavidinnel konjugált Qdot 625 nanokristály. A streptavidin-Qdot 625 nanokristály konjugátum igen magas extinkciós koefficienssel rendelkezik az UV-kék fény tartományban és erős emisszióval a narancs-vörös tartományban. A nanokristályok ezen optikai sajátosságai teszik lehetővé, hogy a hagyományos, minden laboratóriumban megtalálható UV illetve kék-fény alapon működő géldokumentációs rendszerekkel, akár nanogramm alatti fehérje mennyiségeket is detektálhassunk. A Qdot kristály által kibocsátott fluoreszcens szignált könnyedén detektálhatjuk a széles körben elterjedt DNS gél fotózásnál használatos szűrőkkel.

A kit előnyei:

• Egyszerű, gyors munkafolyamat
• Stabil, erős könnyen detektálható jel
• Akár a munkafolyamat közben is elvégezhető detektálás
• Nincs szükség speciális szűrőkre: UV vagy kék-fényű gerjesztés; standard etídium bromid, SYPRO Ruby vagy SYPRO Red emissziós szűrők
• Igényeknek megfelelő reagens kiszerelés: kit formátum vagy egyéni antitest összeállítás
• Alacsony költségek: nincs szükség röntgen filmre
• Azonos illetve nagyobb érzékenység ECL-Plus röntgen filmes detektálásnál
• Multiplex detektálási lehetőség: további más emissziós szűrők alkalmazásával lehetőségünk nyílik arra, hogy az UV tartományban gerjeszthető, de elkülönült, diszkrét emisszióval bíró Qdot nanokristályokat multiplex Western blot detektálásra használjunk